内参β-actin

2024-05-14

1. 内参β-actin


内参β-actin

2. β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?

描述有问题。抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin

做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:
1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到,那么你的体系有问题,因为β-Actin是看家基因编码的,理论上是100%检测到的;
2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到,说明目的蛋白没有表达或者量很低;
3、作为看家基因,β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响,是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后,目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化,这时β-Actin还起到一个半定量的作用。
所谓内参就是内部参照的意思。
--
Western的抗体通常分为一抗和二抗,一抗结合目的蛋白,这是Western变化最多的地方;二抗则比较通用,商品很成熟,二抗带有荧光或者酶标记,它是结合一抗的,但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。Western很少有直接标记的方法。

3. 请问“内参”是什么呀?我是指生物学里的“内参”

做定量PCR中用到的
是一段表达量比较稳定的基因
一般作为对照 
就是说您在做RT-PCR事 为了去除不同标准本再RNA得产量,质量,以及逆转录效率上可能纯在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异,通常选择内参来进行校正和标准化。内参基因的扩增可以反映RNA产量,质量和CDNA合成效率的变化。

请问“内参”是什么呀?我是指生物学里的“内参”

4. 求助水稻的actin 内参基因引物

ACTIN在研究中被发现最不稳定 引物为:
Forward GAAGATCACTGCCTTGCTCC
Reverse CGATAACAGCTCCTCTTGGC

其他较好的水稻内参基因为:
18S rRNA 
Forward ATGATAACTCGACGGATCGC
Reverse CTTGGATGTGGTAGCCGTTT

Glyceraldehyde-3-hosphate dehydrogenase 
 Forward GGGCTGCTAGCTTCAACATC
Reverse TTGATTGCAGCCTTGATCTG

Tubulin 
Forward TACCGTGCCCTTACTGTTCC
Reverse CGGTGGAATGTCACAGACAC

出自一下文章:
《Normalization of reverse transcription quantitative-PCR with
housekeeping genes in rice》
你可以上网下载自己好好研究下 
内参基因对于实时定量的结果非常重要 要慎重选择

5. 内参基因定义是什么啊

内参基因是指在多种样本间恒定表达的已知参照基因,且其表达水平不受研究条件下处理方式的影响。用这个基因的表达水平能准确量化初始材料的载量。

内参基因定义是什么啊

6. Western Blot都可以用beta-actin做内参吗?

描述有问题。抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-actin
做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-actin起到几个作用:
1、如果目的蛋白检测不到而且β-actin也检测不到,那么你的体系有问题,因为β-actin是看家基因编码的,理论上是100%检测到的;
2、如果目的蛋白检测不到但β-actin检测到,说明目的蛋白没有表达或者量很低;
3、作为看家基因,β-actin被认为表达水平不受其它因素影响,是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后,目的蛋白的量在参考β-actin的量后可能发生变化,这时β-actin还起到一个半定量的作用。
所谓内参就是内部参照的意思。
--
western的抗体通常分为一抗和二抗,一抗结合目的蛋白,这是western变化最多的地方;二抗则比较通用,商品很成熟,二抗带有荧光或者酶标记,它是结合一抗的,但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。western很少有直接标记的方法。

7. 哪位有猪的β-actin的PCR内参引物序列啊

`````````````````````分给我吧,别浪费了

哪位有猪的β-actin的PCR内参引物序列啊

8. western blot内参抗体actin为什么出了好几条带

首先要确定你的样品没有降解,基本上看带型可以确定,条带要干净,没有拖尾,其次是你的一抗,这个需要跟别个同学做的对比,这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了,浓度过高,显影底物过强都会出现杂带,而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同,都可能出现在不同的位置
最新文章
热门文章
推荐阅读